La mosca de los cuernos (Haematobia irritans irritans) es un parásito hematófago de distribución mundial que afecta principalmente al ganado bovino. En condiciones de altas cargas parasitarias causa importantes pérdidas económicas. Con el objetivo de conocer la interacción parásito hospedador, nos planteamos estudiar si los bovinos desarrollan una respuesta inmune contra los antígenos de la saliva de la mosca. Para ello, en primer término, a partir de la genoteca de glándula salival de H. irritans existente, se seleccionaron dos secuencias y se sintetizaron las proteínas recombinantes correspondientes. Para producir dichas proteínas, las secuencias fueron insertas en elgenoma de bacterias y se cultivaron en un medio que permitió la expresión de éstas. Luego las proteínas fueron purificadas, por afinidad mediante columna de Niquel-Agarosa y se comprobó la eficiencia de dicha purificación mediante cromatografía. Para confirmar que las proteínas obtenidas tienen relación con las sintetizadas en la saliva de la mosca, se generaron anticuerpos específicos en conejos contra estas proteínas y contra los extractos de glándula salival. Finalmente, mediante la técnica de ELISA se estudió la respuesta inmune desarrollada por bovinos naturalmente expuestos al parásito. Brevemente, placas de ELISA, fueron sensibilizadas con 1 μg/ml de proteínas recombinantes. Luego fueron bloqueadas con PBS-soja y se incubaron con sueros bovinos diluidos y posteriormente se agregó una dilución de anti-Ig-G bovina conjugada a peroxidasa. El revelado fue con OPD y H2O2.Concluimos que los bovinos naturalmente parasitados desarrollan una respuesta inmune humoral específica contra la saliva de la mosca de los cuernos.
Integrantes del equipo:
Sergio Rocha
Silvana Ures
Ximena Ures
Docente orientador:
Martín Breijo