[FCIEN] Investigación y desarrollo de un inmunosensor para el aislamiento y cuantificación de exosomas en sobrenadante de cultivos celulares.

Los exosomas son vesículas extracelulares de aproximadamente 100nm secretadas por la mayoría de as células y especialmente por las células tumorales. Estas vesículas pueden ser internalizadas por otros tipos celulares, por lo que juegan importantes roles en la comunicación intracelular. Más allá de su rol biológico, los exosomas transportan por el torrente sanguíneo un muestreo del contenido de proteínas y ARNs expresados por sus células parentales. De aquí que exista gran interés en disponer métodos rápidos y eficientes para la captación y análisis de exosomas tumorales circulantes, por su promisorio uso como biomarcadores no invasivos. Sin embargo, las tecnologías actuales para el aislamiento y la cuantificación son laboriosos y/o costosas. Por esto, nuestro objetivo es el desarrollo de un inmunosensor de base electroquímica que permita la purificación y cuantificación de exosomas de una forma rápida y compatible con la automatización. Por medio de la formación de una monocapa-autoensamblada de ácido mercaptoundecanoico sobre electrodos serigrafiados de oro, hemos inmovilizado anticuerpos anti-CD9 sobre la superficie del biosensor, logrando una plataforma de anclaje para los exosomas. Luego de optimizar las condiciones de inmovilización, hemos procedido a evaluar el pegado de exosomas purificados de medio condicionado de la línea celular de cáncer de mama MCF-7. Al aumentar la cantidad de exosomas retenidos en la superficie del biosensor disminuye proporcionalmente la corriente originada por la reducción electroquímica del TMB, previamente oxidado por la enzima peroxidasa funcionalizada a anticuerpos anti-IgG agregados junto a la muestra. Se logra así la obtención de un dispositivo capaz de  cuantificar exosomas, disriminándolos adecuadamente de otros tipos de vesículas extracelulares. Estos estudios sirven de base para el desarrollo de un prototipo de biosensor portátil, capaz de detectar exosomas en muestras biológicas como sangre y orina.

Integrantes: Ximena Doldán, Pablo Fagúndez, Romina Mazzuco.
Orientador: Mag. Juan Pablo Tosar
Unidad de Bioquímica Analítica (Facultad de Ciencias-UdelaR)