Aplicación de marcadores moleculares para trazabilidad molecular de Cannabis sativa. Juan Astigarraga, Manuel Bayce, Marcel Bentancor, Leticia Perez Laboratorio de Biología Molecular Vegetal (BMV), Laboratorio de Interacciones Moleculares (LIM) Facultad de Ciencias, UdelaR. El cultivo de diferentes variedades de Cannabis ha adquirido importancia en Uruguay debido a su reciente legalización y regulación en el cultivo, venta y distribución del mismo. Esta planta es en gran medida utilizada con fines recreativos por su efecto psicoactivo, pero además es usada por sus propiedades medicinales. En este contexto de regulación del consumo de esta sustancia psicoactiva, la trazabilidad es fundamental para garantizar que la marihuana circulante se ajuste a los parámetros legales, y también para ofrecer seguridad a los países circundantes, cuya legislación acerca de esta droga es más restrictiva, y que buscan impedir la entrada clandestina de marihuana uruguaya en su territorio. Existen varias técnicas moleculares que, mediante identificación de marcadores de polimorfismos en el ADN, buscan identificar e individualizar diferentes especies, poblaciones e individuos específicamente. La principal ventaja de un método de trazabilidad molecular basado en PCR radica en la poca cantidad de ADN genómico que es requerida. En este trabajo se han elegido los marcadores moleculares del tipo STR (del inglés short tandem repeats) los cuales son marcadores codominantes permitiendo determinar más de un alelo en un mismo individuo y por lo tanto pueden identificarse individuos homocigotas y heterocigotas. A partir de la bibliografía consultada se seleccionaron cuatro parejas de oligonucleótidos, cuyos productos de amplificación están comprendidos entre 100 y 300 y dos parejas de oligonucleótidos que fueron específicamente diseñadas para distinguir entre variedades psicoactivas y no psicoactivas de Cannabis (marihuana y cáñamo, respectivamente). En este trabajo se aisló ADN de diferentes especies de Cannabis mediante el uso de un kit comercial combinado con el uso de un disruptor tisular mecánico y se puso a punto la amplificación por PCR de cada una de estas regiones polimórficas. Los resultados obtenidos han permitido individualizar diferentes variedades de Cannabis analizadas por lo cual se puede concluir que los marcadores usados han mostrado tener un poder alto de resolución y discriminación. Usando los patrones de expresión para las diferentes variedades ensayadas, se pudo construir una base de datos que está siendo ampliada en la medida que se incorporan nuevas muestras a analizar.
