El eje PD-1/PD-L1 es una estrategia de defensa inmunitaria del organismo para impedir el daño del tejido sano. Distintos tipos de cáncer utilizan la proteína PD-L1 para garantizar su supervivencia, de manera que la expresión de esta proteína es de gran relevancia para técnicas de diagnóstico y tratamiento que resulten menos nocivas para el paciente.Con el objetivo de estudiar la expresión de dicha proteína, se realizó la conjugación del anticuerpo monoclonal Atezolizumab con el fluoróforo Cy5 a través de las reacción bio-ortogonal entre [1,2,4,5]- tetrazina y trans-cicloocteno (TCO). En un proceso de conjugación en dos pasos: primero se incorpora el grupo trans-cicloocteno (TCO) al anticuerpo monoclonal Atezolizumab y posteriormente se incorpora el fluoróforo mediante una reacción de cicloadición con un derivado Tetrazina-Cy5 (Tz-Cy5). Con el fin de estudiar la estabilidad del inmunoconjugado se utilizó la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Se realizaron además preparados de microscopía con inmunomarcación y cultivo celular en cabina de flujo laminar en líneas de cáncer de mama (MDA-MB-231), melanoma (B16-F10) y en una línea celular humana de células de glioblastoma (U-87 MG). Algunas de las condiciones ensayadas incluyeron el cultivo celular en presencia de interferón gamma (IFN-γ) a modo de inducir expresión de PD-L1 y condiciones de bloqueo o el uso de un IgG control. Los resultados obtenidos muestran que el anticuerpo conjugado conservó sus propiedades de reconocimiento por PD-L1 y que por lo tanto, se pudo observar una señal localizada en la membrana mediante microscopía confocal y epifluorescencia.
